Коллектив авторов - Морфологическая диагностика. Подготовка материала для гистологического исследования и электронной микроскопии

Приготовленный фиксирующий раствор стабилен в течение 12 мес. Особенно его рекомендуют для фиксации препаратов головного мозга и почки (Kiernan J. A., 2008). Время фиксации составляет 8 – 24 ч. По окончании фиксации рекомендуется промывка в воде, после чего для обезвоживания используют 70 %-й этанол.

Фосфатный буфер Замбони . Способ приготовления: однозамещенный фосфат натрия (NaH 2PO 44··H 2O) – 3,31 г, двузамещенный фосфат натрия безводный (Na 2HPO 4) – 17,89 г, дистиллированная вода – до 1 л.

Цинк-этанол-формальдегид (Kоржевский Д. Э. [и др.], 2006). Способ приготовления: для приготовления 1 л фиксатора берут 900 мл 96 %-го этанола, 100 мл концентрированного раствора формальдегида и 10 г хлорида цинка. Готовый раствор сохраняет свои свойства в течение 4 – 5 нед. Продолжительность фиксации составляет 18 – 24 ч. Поскольку одновременно с фиксацией материала происходит его обезвоживание, после завершения фиксации кусочки перекладывают сразу в 96 %-й этанол. Этот фиксатор рекомендован для обработки головного и спинного мозга, поскольку наряду с улучшением сохранности тканевых антигенов обеспечивает высокое качество окраски по Нисслю.

1. Аничков Н. М., Данилова И. А., Васильев О. Д. [и др.]. Применение раствора полигуанидина для фиксации биологических и анатомических объектов // Морфология. – 2010. – Т. 137, № 1. – С. 58 – 61.

2. Арасланов С. А., Зайцев В. Б., Мешандин А. Г. [и др.]. Новый фиксатор биологического материала // Морфология. – 2007. – Т. 131, № 1. – С. 79 – 81.

3. Артишевский А. А., Леонтюк А. С., Слука Б. А. Гистология с техникой гистологических исследований. – Минск: Вышэйшая школа, 1999. – 236 с.

4. Вайль С. С. Практическое руководство по патолого-гистологической технике. – Л.; М.: ОГИЗ, 1934. – 228 с.

5. Коржевский Д. Э., Гиляров А. В. Основы гистологической техники. – СПб.: СпецЛит, 2010. – 96 с.

6. Коржевский Д. Э., Григорьев И. П., Отеллин В. А. Применение обезвоживающих фиксаторов, содержащих соли цинка, в нейрогистологических исследованиях // Морфология. – 2006. – Т. 129, № 1. – С. 85 – 86.

7. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. – М.: Мир, 1969. – 643 с.

8. Меркулов Г. А. Курс патогистологической техники. – Л.: Медицина, 1969. – 423 с.

9. Ромейс Б. Микроскопическая техника: пер. с нем. – М.: Изд-во иностр. литер., 1954. – 718 с.

10. Bancroft J. D., Gamble M. Theory and practice of histological techniques. – Edinbugh; London; N. Y.: Churchill Livingstone, 2002. – 796 p.

11. Kiernan J. A. Histological and histochemical methods. Theory and practice. – London: Scion Publishing Ltd, 2008. – 606 p.

12. Naish S. J. Immunochemical staining methods. – Glostrup: DAKO Corporation, 1989. – 41 p.

13. Zamboni L., DeMartino C. Buffered picric acid – formaldehyde: a new rapid fixative for electron microscopy // J. Cell Biol. – 1967. – Vol. 35. – P. 148A.

Для изучения гистологических препаратов плотных кальцифицированных тканей могут быть изготовлены шлифы, которые позволяют сохранить минеральные компоненты, придающие тканям высокую плотность. Однако эта процедура трудоемка и требует специального оборудования. На обычном микротоме невозможно изготовить срезы недекальцинированной костной ткани. Перед заливкой таких объектов в парафин или целлоидин производят декальцинацию, в ходе которой из объекта удаляются соли кальция, он теряет свою плотность и становится пригодным для последующей микротомии. Как правило, декальцинацию проводят после полной фиксации ткани. Однако существуют методы, благодаря которым декальцинация начинается одновременно с фиксацией. В этом случае фиксирующая среда должна содержать декальцинирующее вещество. После декальцинации в кислотах желательна тщательная промывка материала в слабощелочных растворах на протяжении 1 – 3 ч.

В литературе указывается много прописей различных декальцинирующих составов. Наиболее часто употребляемые из них приводятся в руководстве В. В. Некачалова (2000). При необходимости для декальцинации может быть использован раствор любой кислоты. Вместе с тем необходимо учитывать:

– простоту изготовления применяемых декальцинирующих растворов, безопасность для работы;

– скорость выполнения декальцинации;

– возможное повреждающее действие декальцинирующего раствора на костную ткань;

– оценку качества и информативности для анализа изготовляемых гистологических препаратов;

– возможность длительного хранения гистологических препаратов в архиве.

При декальцинации ткани, содержащей много жира (губчатой костной ткани пожилых людей, костного мозга и т. п.), ее необходимо обезжиривать, выдерживая объект 3 – 5 дней в 80 – 90 %-м этаноле (лучше в термостате при температуре 37 °C).