Коллектив авторов - Морфологическая диагностика. Подготовка материала для гистологического исследования и электронной микроскопии

Метод Кардазевича. Удаление осадков лучше всего производится путем помещения неокрашенных срезов в 1 – 5 % раствор нашатырного спирта (NН 4ОН) в 70 %-м этиловом спирте. Время исчезновения осадков варьирует от 5 мин до 4 ч. Cтруктура и окрашиваемость объекта остаются неизмененными. Этот метод превосходит часто употребляющийся метод Верокая. Единственный недостаток этого способа состоит в том, что, кроме формалинового осадка, растворяется и малярийный пигмент. Остальные пигменты, прежде всего липофусцин, меланин, гемосидерин, антракотический пигмент, не растворяются (Ромейс Б., 1954).

Метод Верокая. Для освобождения от формалиновых осадков срезы помещают на 10 мин в смесь 1 части 1 %-го водного раствора едкого калия и 100 частей 80 %-го спирта, затем на 5 мин – в дважды сменяемую воду, на 5 мин – в 80 %-й спирт, после чего промывают в проточной воде (Ромейс Б., 1954).

Размягчение перефиксированных препаратов. Если вследствие длительного пребывания в крепком формалиновом растворе препараты станут слишком плотными, то избыточную плотность можно устранить помещением их на 14 дней в 1 %-й раствор азотнокислого серебра или в 10 %-й раствор лимонной кислоты (Ромейс Б., 1954).

Формалин часто комбинируют с другими фиксирующими жидкостями, причем непосредственно перед употреблением, так как жидкости, особенно если они содержат окислители, после смешения достаточно быстро изменяют свои свойства из-за окисления формальдегида.

Пикриновая кислота(тринитрофенол) – желтое кристаллическое вещество, слаборастворимое в воде и хорошо растворимое в органических растворителях. В сухом виде пикриновая кислота взрывоопасна. В увлажненном состоянии и в водных растворах она не способна к детонации. В лаборатории не следует хранить сухую пикриновую кислоту. Она очень часто применяется в технике фиксации, особенно в соединении с другими веществами, такими как формалин, ледяная уксусная кислота, азотная кислота, сулема, в чистом виде – сравнительно редко.

Из многочисленных смесей, содержащих пикриновую кислоту, на первом месте по комплексу показателей (качество фиксации, простота приготовления, отсутствие эффекта перефиксации) стоит жидкость Буэна, состоящая из пикриновой кислоты, формалина и ледяной уксусной кислоты. Способность тканей к окраске очень хорошо сохраняется во всех пикриновокислых смесях. При исследовании на содержание кальция нужно учитывать, что пикриновая кислота оказывает слабое декальцинирующее действие (Ромейс Б., 1954).

В фиксационной технике пикриновая кислота употребляется обычно в виде насыщенного водного раствора, к которому перед употреблением прибавляют другие жидкости. По Б. Ромейсу, для приготовления запасного раствора, который может сохраняться очень долго, всыпают 30 – 50 г пикриновой кислоты в бутылку объемом 1 – 2 л, наполняют ее подогретой дистиллированной водой, энергично взбалтывают и дают остыть. При комнатной температуре в 100 мл воды растворяется около 1,2 г кислоты, так что в остывшем растворе на дне осаждается большой избыток нерастворенных кристаллов. Если раствор использован, то к осадку снова добавляют горячую воду. Чтобы всегда был запас, лучше всего иметь две запасные емкости с пикриновой кислотой.

Отмывка пикриновой кислоты производится почти исключительно 70 – 80 %-м спиртом, но не водой, так как вызванные пикриновой кислотой осадки большей частью нерастворимы в воде. Кроме того, при помещении в воду наступает набухание соединительной ткани. При отмывке следует несколько раз сменить спирт, однако обычно нет необходимости полностью вымывать пикриновую кислоту (Ромейс Б., 1954).

Желтая окраска срезов после регидратации может быть устранена обработкой в 5 %-м водном растворе тиосульфата натрия.

Пикриновая кислота – формалин-уксусная кислота. Эта предложенная Буэном смесь принадлежит к лучшим фиксирующим жидкостям. Относительно быстро проникающий фиксатор рекомендуется как для обзорных препаратов, так и для специальных исследований. Жидкость Буэна пригодна и для фиксации эмбрионов. Окрашиваемость тканей очень хорошая. Коллагеновые волокна в ней несколько набухают; жиры и липоидные вещества сохраняются хуже. Считается, что жидкость Буэна недостаточно хорошо фиксирует ткани почки (Меркулов Г. А., 1969).

Жидкость Буэна . Фиксатор готовится ex tempore из насыщенного 1,2 %-го водного раствора пикриновой кислоты, концентрированного формальдегида (35 – 40 %) и ледяной уксусной кислоты в соотношении 15: 5: 1. Продолжительность фиксации – около 24 ч при комнатной температуре. Возможно и более длительное (до нескольких суток) пребывание срезов в жидкости Буэна без ухудшения качества последующей окраски. После фиксации полагаются короткая промывка в воде (1 – 15 мин) и более длительная (до суток) – в 70 %-м этаноле, обезвоживание и заливка в парафин. Заливка в целлоидин нежелательна. После фиксации в жидкости Буэна срезы ярко окрашиваются кислыми красителями (эозином и др.) и несколько хуже воспринимают основные анилиновые красители. В связи с этим для окончательного удаления пикриновой кислоты после депарафинирования рекомендуют обработать срезы в 0,2 %-м водном растворе карбоната лития в течение 30 с (Коржевский Д. Э. [и др.], 2010).