Надежда Полушкина - Диагностический справочник иммунолога

Снижение гемолитической активности комплемента может быть признаком такого заболевания, как системная красная волчанка, или указанием на наличие наследственного дефекта.

Определение уровня пропердина

Пропердин постоянно присутствует в определенных количествах в нормальной сыворотке крови. Это важный гуморальный фактор, участвующий в обеспечении бактерицидных, вируснейтрализующих и гемолитических свойств крови. Метод основан на способности пропердина связываться с различными полисахаридами.

Реакция бласттрансформации на неспецифические митогены

Эта реакция позволяет проводить функциональную оценку Т– и В-лимфоцитов, а также для контролировать использование иммуномодуляторов. Кроме этого, с помощью этой реакции изучается пролиферативный ответ Т-лимфоцитов на неспецифические митогены, исследуется синтез иммуноглобулинов В-лимфоцитами, стимулированных поликлапальным В-клеточным активатором – митогеном лаконоса. Стимуляция синтеза иммуноглобулинов происходит только при взаимодействии Т-хелперов с В-лимфоцитами.

Реакция проводится в динамике с различными дозами митогена и не всегда свидетельствует о нарушении клеточно-опосредованного иммунитета.

Определение С-реактивного белка

Наличие в крови С-реактивного белка зачастую является показателем активности инфекционного процесса. Определение его проводится в реакции презентации с моноспецифической антисывороткой. Для этого капилляр заполняют на треть антисывороткой, затем добавляют аналогичный объем испытуемой сыворотки больного, тщательно перемешивают и инкубируют при температуре 37 °C. Через 2 часа учитывают предварительный результат. Окончательный результат определяют после выдерживания капилляров при комнатной температуре.

В основе лежит определение специфичности взаимодействия реакции «антиген – антитело», которая формирует иммунный ответ на чужеродный агент.

Методы оценки специфической реактивности:

1) определение клеточного иммунитета, Т– и В-лимфоцитов;

2) определение количества иммуноглобулинов;

3) определение циркулирующих иммунных комплексов.

Определение Т– и В-лимфоцитов

Для этого применяется несколько методов. Например, розеткообразование с эритроцитом барана или мыши. Розетка образуется в результате связывания поверхностных рецепторов с введенными в субстрат эритроцитами барана. Она состоит обычно из лимфоцита и 3–5 присоединенных эритроцитов.

Другой метод – метод мононуклеарных антител, для которого используются соответствующие моноспецифические сыворотки, различающиеся в клинической практике по СD-рецепторам:

– СD (3) – Т-лимфоциты;

– СD (4) – Т-лимфоциты хелперы;

– СD (8) – Т-лимфоциты супрессоры;

– СD (16) – WK (натуральные киллеры);

– СD (72) – В-лимфоциты.

Для исследования используются люминесцентный микроскоп и проточный цитометр. По количественному содержанию СD-рецепторов и их соотношению судят о врожденных или приобретенных нарушениях, которые имеют полиэтиологическую природу.

В норме число Т-лимфоцитов составляет 70–80 % от общего числа лимфоцитов периферической крови.

Их снижение отмечается при активности гепатита и системной красной волчанке.

Методы выявления В-лимфоцитов.К ним относятся:

– цитотоксическая реакция с антисывороткой против антигенов;

– иммунофлюоресцентные методы с меченными антисыворотками;

– непрямой метод обнаружения иммуноглобулиновых рецепторов, с использованием стафилококков, содержащих белок А;

– определение с помощью эритроцитов и других частиц;

– смешанный антиглобулиновый тест;

– образование розеток с микробами, покрытыми иммуноглобулинами.

Определение иммуноглобулинов в крови.Определение гуморального иммунитета производится следующими методами:

– радиальная иммунодиффузия в геле с моноспецифическими сыворотками по Манчини;

– нефелометрически с моноспецифическими сыворотками по Чиркину;

– иммуноферментный анализ (ИФА).

С помощью радиальной иммунодиффузии на агаровом геле по Манчини производится количественная оценка содержания JgA, JgM, JgG в сыворотке крови. Это необходимо для диагностики первичной и вторичной иммунной недостаточности, миеломной болезни, а также для проведения контроля иммуномодулирующего лечения.

Сущность метода заключается в том, что лунки агарового геля, содержащего моноспецифическую антисыворотку, заполняют антигеном (в нескольких разведениях с заранее известной концентрацией) и исследуемой сывороткой. Стандартный антиген диффундирует через гель и взаимодействует с антисывороткой, образуя вокруг лунки кольцо преципитации, диаметр которого пропорционален концентрации антигена. График зависимости квадрата диаметра кольца от концентрации антигена представляет собой прямую линию, по которой, зная диаметр кольца исследуемой сыворотки, легко определить концентрацию антигена.