Серафима Гурьева - Микробиология. Начало

Сложные– готовят из простых добавляя к ним кровь, сыворотку, углеводы.

3) По источнику: естественные -готовят из продуктов животного происхождения, растительного.

Синтетического– готовят из определенных органических и неорганических соединений.

4) По назначению: Основные– МПА, МПБ, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода.

Специальные– для выделения и выращивания м.о. которые не растут на основных:

А) Элективный(избирательные) – для определения видов микробов, росту которых они стимулируют, задерживая или подавляя рост сопутствующей микрофлоры.

Б) Дифференциально -дианостческие –позволяют отличить один вид микробов от других по ферментативной активности ( Среды Гисса- углеводы и индикаторы).

Питательные среды-субстраты для культивирования( выращивания) м.о., необходимо для изучения свойств микробов: морфологических, биохимических, антипенных и т.д.

Требования к питательным средам:

1) Питательность– содержания достаточного количества питательных веществ в легкоусваемой форме.

2) Оптимальный водородный показатель– слабощелочная среда ( 7.2-7.4). Исключениемявляется – возбудитель туберкулеза ( 6.2-6.8), холерный вибрион ( 8.5-9.0).

3) Буферность– способность нейтрализовать продукты обмена и поддерживать оптимальный уровень рH.

4) Изотоничность– осмотическое давление питательной среды равно соматическому давлению микробной клетки (0,5% р-р NaCl).

5) Стерильность– отсутствие посторонних м.о.

6) Окислительно- восстановительный потенциал– соотношение веществ способных отдавать и принимать электроны в процессе биохимических реакциях.

7) Унифицированность– наличие примерно одинакового набора компонентов, что обеспечивает возможность культивировать большое количество видов м.о.

8) Прозрачность– степень просматриваемости на свету, обеспечивает возможность изучения характера, объема роста м.о. на питательной среде через определенный промежуток времени.

Исходным сырьём для большинства сред- заводские полуфабрикаты, растворимые и животные продукты ( сыворотки, молоко, кровь, уголь и т.д.).

Этапы приготовления сред:

1) Варкана водяной бане, на открытом огне или в варочных котлах подогреваемых паром.

2) Установка оптимального р Hс помощью индикаторных бумажек или специальными пробами (иномерами), корректировка рH среды при «+» растворов кислот и щелочей.

3) Осветлениес помощью яичного белка для сред, которые при варке мутнеют или темнеют.

4) Фильтрацияжидких и расплавленных сред через ватно-марлевый фильтр или путём отстаивания.

5) Розливсред по пробиркам, флаконам, колбам и т.п.

6) Стерилизациязависит от состава среды и проводится в автоклавах, на водных банях или в свертывателе Коха(это металлический цилиндр, обшитый снаружи материалом (линолеум, асбест), плохо проводящим тепло. На дно наливают воду, а стерилизующий материал помещают сверху на подставку. Аппарат закрывают конической крышкой, в которой имеются отверстия для термометра и выхода пара. Внизу расположен кран для спуска воды. Стерилизацию проводят текучим паром при 100 °С в течение 30-60 мин. При таком режиме погибают вегетативные клетки спорообразующих и неспорообразующих форм микробов. В аппарате Кохастерилизуют те материалы, которые не выдерживают температуру выше 100 °С(желатин, молоко, углеводные среды и др.).

Белковые среды и сыворотку крови, не переносящие температуру 100 °С, стерилизуют дробно при 56-58 °С в водяной бане).

7) Контрольпроводится с целью подтверждения стерильности и оптимальности рH.

Алгоритм приготовления простых питательных сред:

1) Мясопептонный бульон(МПБ):

А) К мясной воде «+» 1% пептон, 0.5 частей NaCl.

Б) Кипятят на слабом огне 10-15 минут до растворения веществ.

В) Оптимизируют рH, снова кипятят 30-40 минут, до выпадения осадка.

Г) Фильтруют, доливают до первоначально объема водой.

Д) Стерилизуют 20 минут при 120°С.

2) Мясопептонный агар(МПА):

А) К МПБ до или после стерилизации»+» 2-3% измельченного агар-агара.

Б) Кипятят, помешивая на слабом огне до полного расплавления агара. Можно варить в аппарате Коха или в автоклаве.