Коллектив авторов - Молекулярная морфология. Методы флуоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии

При флуоресцентной микроскопии ядерную ДНК, как правило, окрашивают DAPI (4,6-диамидино-2-фенилиндолом). DAPI специфически связывается с ДНК и обладает синей флуоресценцией при возбуждении ультрафиолетовым светом ртутной лампы. При проведении конфокальной микроскопии флуоресценцию DAPI необходимо возбуждать ультрафиолетовым аргоновым лазером (360 нм) или мультифотонным (фемтосекундным пульсирующим) лазером. Диодный лазер (405 нм), которым обычно комплектуются бюджетные варианты конфокальных микроскопов, для этих целей непригоден. В этом случае вместо DAPI используют другие флуоресцентные красители. Их выбор в настоящее время достаточно широк (Приложение 1).

С точки зрения химической организации выделяют четыре основные группы флуоресцентных красителей, применяемых для окрашивания нуклеиновых кислот (НК):

1. Наиболее часто применяются цианиновые(полиметиновые) красители. Они имеют в качестве флуорофорной системы группы – СН=, образующие цепь сопряженных двойных связей с электронодонорной и электроноакцепторной группами на концах. Цианиновые красители образованы двумя ароматическими или азотсодержащими гетероциклическими кольцами, соединенными полиметиновой цепью двойных сопряженных углерод-углеродных связей. Выделяют симметричные (полиметиновые красители, содержащие одинаковые гетероциклы на концах полиметиновой цепи) и несимметричные. По количеству метиновых групп различают: цианиновые красители с одной метиновой группой – монометинцианины, красители с тремя метиновыми группами – триметинцианины (карбоцианины), симметричные цианиновые красители с более длинной цепочкой метиновых групп – полиметинцианины (поликарбоцианины). Также существуют мономерные и димерные цианиновые красители.

2. Фенантридины(этидия бромид, пропидия йодид ).

3. Акридины(акридиновый оранжевый, акридиновый красный, акридиновый желтый).

4. Производные индола и имидазола(Hoechst, DAPI).

В зависимости от механизма взаимодействия с молекулой НК различают три типа флуоресцентных красителей:

– интеркалирующие красители , внедряющиеся между парами азотистых оснований. При интеркаляции присутствуют нековалентные межмолекулярные взаимодействия – водородные, ван-дер-ваальсовые, электростатические, а также стекинг-взаимодействия между ДНК и интеркалятором (Вардеванян П. О. [и др.], 2010). Пример интеркалирующего красителя – пропидия йодид;

Текст предоставлен ООО «ЛитРес».

Прочитайте эту книгу целиком, купив полную легальную версию на ЛитРес.

Безопасно оплатить книгу можно банковской картой Visa, MasterCard, Maestro, со счета мобильного телефона, с платежного терминала, в салоне МТС или Связной, через PayPal, WebMoney, Яндекс.Деньги, QIWI Кошелек, бонусными картами или другим удобным Вам способом.

В русскоязычной литературе понятия «флуорофор» и «флуорохром» обычно не различают, однако иногда под термином «флуорохром» подразумевают собственно флуоресцирующую молекулу, а под «флуорофором» – конъюгат флуорохрома с макромолекулой либо флуоресцирующий компонент сложной макромолекулярной структуры.10