Array Британская ассоциация по ветеринарии мелких - Руководство по репродукции и неонатологии собак и кошек

На основании своего опыта автор считает, что к условиям, обеспечивающим сбор спермы, относятся: присутствие раздражителя — обычно самки, находящейся в состоянии течки (предпочтительнее всего на пике эструса, но если сука будет вести себя спокойно, подойдет любая стадия); отдельное помещение и выход на площадку, на случай, если самец предпочитает предварительно поиграть с самкой; минимальное количество людей. Перечисленные условия благоприятно сказываются на параметрах спермы и значительно облегчают процедуру.

Кобелю дают возможность совершить садку. При выдвижении пениса из препуция оператор отводит последний назад и сдавливают пенис пальцами каудально от головки (фиг. 9.4).

Сбор спермы невозможен до достижения полной эрекции и прекращения толчкообразных движений самца. Для сбора спермы автор использует одноразовую воронкообразную пластиковую чашу. При проведении манипуляции необходимо исключить вероятность травмирования пениса о край сосуда. Такая травма может приводить к разрыву мелких сосудов головки пениса и попаданию крови в эякулят. Особенно склонны к кровотечениям старые собаки. Неизвестно, как присутствие крови сказывается на параметрах спермы, однако ее наличие затрудняет анализ. В идеале образец должен состоять лишь из второй фракции (содержащей сперматозоиды), особенно если сперму предполагается заморозить. При немедленном использовании для искусственного осеменения в пробирку со спермой добавляют 1–2 мл секрета предстательной железы и применяют без дополнительных растворителей.

Сбор спермы с использованием течной суки в качестве раздражителя. Оператор отводит препуций, захватывает луковицы в ладонь, а пальцами сжимает основание полового члена позади луковиц. Сперму собирают непосредственно в пластиковую пробирку

При проведении анализа определяют цвет семенной жидкости. Нормальным считают оттенки от молочного до слабо-кремового в зависимости от плотности; желтый оттенок недопустим и указывает на попадание мочи или на воспалительный процесс; красный свидетельствует о присутствии крови. Причину отклонения цвета эякулята от нормы выявляют в ходе микроскопического исследования. Эякулят, содержащий лейкоциты, эритроциты или мочу, центрифугируют при 300–1000 об/мин в течение 5 минут в разбавителе TRIS (табл. 9.1) или растворе с добавлением антибиотиков, супернатант удаляют, а осадок снова разводят в свежем разбавителе, содержащем антибиотики, и используют для искусственного осеменения.

Буферная база содержит антибиотики

Трисгидроксиметиламинометан — 6,056 г;

Лимонная кислота — 3,400 г;

Фруктоза — 2,500 г;

Дистиллированная вода двойной очистки — 200 мл;

Кристаллический пенициллин — 200 000 ЕД;

Дигидрострептомицин — 0,2 г;

Яичный желток вводят непосредственно перед добавлением воды (20 % объема) 2 мл желтка на 8 мл TRIS базы + антибиотики.

Оценку плотности спермы, т. е. концентрации сперматозоидов на единицу объема проводят с использованием счетной камеры и микроскопа или фотометрического счетчика для спермы (фиг. 9.5). Количество сперматозоидов в эякуляте вычисляют исходя из их числа в единице объема и полного объема. Общее количество сперматозоидов в сперме собак варьирует от 200 до 1200 х 10 6, содержание во второй фракции 100–700 х 10 6/мл.

Фотометрический калибратор Spermacue™ для измерения плотности (количества сперматозоидов в мл) свежеполученной неразведеннои спермы собак и лисиц

Прогрессивную подвижность (ПП) оценивают визуально под микроскопом со 100-кратным увеличением. Показатель прогрессивной подвижности (количество сперматозоидов с выраженным поступательным движением) минимально может составлять до 5 % при норме 75–90 % в неразбавленном свежесобранном эякуляте. В замороженной сперме, если ее предполагается использовать для искусственного осеменения, подвижность сперматозоидов после размораживания должна составлять не менее 50 %. Активность сперматозоидов (скорость поступательного движения) также является важным показателем, которому субъективно присваивается значение от 0 до 5, где 0 означает отсутствие прогрессивного движения (некроспермия), а 5 является наивысшим показателем. Нормальная фертильная сперма обычно имеет показатель 3–5; сперма, предназначенная для замораживания, перед заморозкой должна иметь высокие показатели, предпочтительно 5. Низкая температура снижает подвижность сперматозоидов, поэтому для анализа рекомендуется подогревать предметное стекло, в особенности при работе с размороженной спермой. Физиологические растворы, особенно содержащие глицерин, также временно снижают активность сперматозоидов, однако на подогретом предметном стекле она обычно восстанавливается через 2–3 минуты.