Array Британская ассоциация по ветеринарии мелких - Руководство по репродукции и неонатологии собак и кошек

Для более точного определения на практике используют набор для разведения крови 1/100 для подсчета лейкоцитов и гемоцитометр Нейбауера. Берут 20 мкл разведенной спермы (разводят как кровь для подсчета лейкоцитов) и помещают в камеру гемоцитометра. Количество клеток в центральном квадратном миллиметре умножают на 10 6и на объем спермы, получают число сперматозоидов в эякуляте. Суточную продукцию спермы определяют, собирая сперму ежедневно в течение 5 дней до стабилизации количества сперматозоидов, т. е. до истощения внегонадного резерва. У здорового фертильного кобеля она составляет примерно 400 х 10 6сперматозоидов за 5 дней.

Морфология сперматозоидов. Для проведения исследований готовят мазок образца спермы на предметном стекле по аналогии с мазком крови. После высыхания мазок окрашивают в течение 5 минут эозин-нитрозином, анилиновым синим или кристаллическим фиолетовым и изучают под микроскопом при 1000-кратном увеличении в иммерсионной среде. Чтобы дать заключение, подтверждающее наличие или отсутствие морфологических дефектов спермы, необходимо исследовать как минимум 100 сперматозоидов.

Лейкоциты. Чтобы определить число лейкоцитов в микролитре, подсчитывают их количество в четырех угловых квадратах гемоцитометра и умножают полученную цифру на 250. При подозрении на инфекцию необходим дифференцированный подсчет лейкоцитов.

Посев спермы. Если цитология эякулята дает основания предполагать наличие инфекции, проводят бактериологическое исследование семени и секрета предстательной железы.

Объем и рН эякулята. Определяют оба показателя.

Определение щелочной фосфатазы в сперме. Щелочная фосфатаза вырабатывается в придатке семенника и присутствует в сперме здорового кобеля. Низкая концентрация или отсутствие фирмента указывает на неполную эякуляцию или двустороннюю обструкцию придатков или семяпровода.

Характеристики эякулята здоровых кобелей приведены в табл. 8.1.

Незначительные отклонения от нормы не свидетельствуют о бесплодии. Иногда результат, неудовлетворительный по одному параметру, компенсируется превосходными показателями по другому, т. е. кобель со сниженной по сравнению с нормой концентрацией спермы может использоваться в качестве производителя благодаря повышенной подвижности сперматозоидов. В случае первичного бесплодия или неясностей в диагнозе рекомендуется провести повторный анализ спермы. Повторный сбор эякулята следует производить через 2 месяца после первого исследования, поскольку за этот период происходит переход к новому циклу сперматогенеза.

Параметр— Значение

pH — 6,3–6,7;

Объем: — 1–30 мл;

1-я фракция — 1–12 мл;

2-я фракция — 1–2 мл;

3-я фракция — до 20 мл;

Сперматозоиды: подвижность — > 70 %;

С нормальной морфологией — > 80 %;

С морфологическими дефектами — <20 %;

Количество сперматозоидов — >200 х 10 6;

Лейкоциты — < 2000/мл;

Щелочная фосфатаза (МЕ/л) — 5000–40000.

В связи с тем, что секреция многих гормонов носит импульсный характер, к интерпретации единичных анализов следует подходить с осторожностью. Многие заболевания, предполагающие эндокринологическое исследование, неизлечимы, поэтому необходимо принимать во внимание затраты на его проведение. Кроме того, дополнительные расходы могут возникать в связи с обращением в неспециализированные лаборатории, проводящие исследование в порядке исключения.

Приведенный ниже протокол поможет выявить источник эндокринной дисфункции.

Выработка тестостерона. Наиболее надежный метод оценки продукции тестостерона основан на применении стимуляционного теста с использованием человеческого ХГ (44 МЕ/кг внутримышечно) или ГнРГ (2,0 мкг/кг внутримышечно). Определение концентрации тестостерона проводят перед введением и спустя 4 часа после введения человеческого ХГ или перед введением и через час после введения ГнРГ Нормой считается пост-стимуляционная концентрация тестостерона в пределах 3,7–7,5 нг/мл.

Гонадотропины в сыворотке крови. В связи с эпизодическим характером секреции гонадотропинов для определения ЛГ и ФСГ рекомендуется проводить анализ по крайней мере 3 образцов, взятых с интервалом в 20–30 минут. Нормальными показателями считают соответственно 34–85 и 73–84 нг/мл.

Интерпретация данных эндокринного анализа. Низкое содержание тестостерона и ЛГ в сыворотке указывает на дисфункцию гипоталамуса, гипофиза или семенников. Устойчиво низкие значения ЛГ после введения ГнРГ (2,0 мкг/кг внутримышечно) позволяют предположить поражение гипоталамуса или гипофиза. Однако повышение уровня ЛГ в результате стимуляции с помощью ГнРГ указывает на нормальное функционирование гипоталамуса/гипофиза, следовательно, источником проблем являются тестикулы. Низкие показатели тестостерона при повышенной концентрации ЛГ указывают на дисфункцию клеток Лейдига. Концентрация ФСГ повышается у животных с дисфункцией семенников, вероятно, из-за нарушения выработки ингибина, обусловленного поражением гонад. Это повышение коррелирует со степенью расстройства сперматогенеза.